抗体中和细胞因子诱导细胞因子产生

1、材料

指示细胞系（见速查表针对给定的细胞因子）

培养基：RPMI1640+10%FBS。

96孔板（平底）（Costar Cat.No.3595）

细胞因子ELISA配对或ready-set-go kit

2、仪器

吸管和移液器

恒湿培养箱

96孔微孔检测分光光度计

3、持续时间

孵育时间24-48小时

测定样品准备时间1小时

4、实验步骤

（1）向96孔板每孔中加50ul培养基1640.

（2）使用两倍的连续稀释液从第3排到第12排依次稀释功能级别的抗细胞因子抗体（见速查表标准范围），留1,2排不加。

（3）2排到12排每孔加50ul重组细胞因子和样品（浓度见速查表，第二排是细胞因子和指示细胞组，1排是只有细胞的对照组）。

（4）1640培养基洗指示细胞三次，重悬调整细胞浓度到2-3.5×105/ml（见速查表）。

（5）每孔加100ul细胞悬液。

（6）37度 5%CO2 恒湿培养箱培养24-48小时。

（7）收获上清ELISA检测细胞因子。

（8）绘制标准曲线分析数据。

细胞因子检测速查指南表（human and mouse）：