抗体中和细胞因子诱导指示细胞增殖

1、材料

指示细胞系：见速查表。

培养基：RPMI1640+10%FBS。

检测培养基：RPMI1640+2%FBS。

96孔板（平底）（Costar Cat.No.3595）

MTT溶液：（Sigma Cat. No. M5655）5mg/ml 储液（PBS稀释），室温避光保存。

MTT裂解液：20%SDS或50%DMF。

2、仪器

吸管和移液器

恒湿培养箱

96孔微孔检测分光光度计

3、实验持续时间

孵育时间24-48小时

测定样品准备时间1小时

4、实验方案

（1）向96孔板每孔中加50ul检测培养基。

（2）使用两倍的连续稀释液从第3排到第12排依次稀释功能级别的抗细胞因子抗体，留1和2排不加，作为对照。

（3）2排到12排每孔加50ul重组细胞因子和样品（浓度见速查表，第二排是细胞因子和指示细胞组），1排是只有细胞的对照组。

（4）37度 5%CO2 恒湿培养箱培养2小时。

（5）1640培养基洗指示细胞三次，检测培养基重悬调整细胞浓度到2-3.5×105/ml（见速查表）。

（6）每孔加100ul细胞悬液。

（7）37度 5%CO2 恒湿培养箱培养24-48小时。

（8）每孔加10ul MTT溶液（5mg/ml），孵育4小时。

（9）每孔加50ul MTT 裂解液，孵育过夜。

（10）570-650nm 读板。

（11）绘制标准曲线分析数据。