纳米晶体标记细胞及活体成像参考实验方法

纳米晶体标记细胞及活体成像参考实验方法

一 实验材料

(1) 细胞及完全培养基

(2) 8 孔 BD Falcon Culture Slides (cat. 354118)

(3) Reactive eFluor® Nanocrystals - InGaP Composition

(4) 0.2 μm 注射式滤器或其他无菌滤器

(5) 1CC胰岛素注射器29 X 1/2-gauge（静脉注射用）

(6) 裸鼠等动物模型

(7) 荧光成像系统

二 实验步骤

细胞传代

(1) 从75cm2的培养瓶中传代细胞至BD Falcon Culture Slides，每孔密度为2万细胞（细胞密度随着使用培养板不同而不同）。

(2) 37度，5%CO2培养箱中培养细胞24-48小时，使细胞铺满培养板。

标记

(1) 使用完全培养基稀释纳米晶体，使最终OD值介于0.1至0.025之间。由于不同细胞适用纳米晶体的最佳浓度不同，建议滴定法预实验确定最佳浓度。

(2) 如果需要，使用0.2微米注射式滤器过滤标记溶液。

(3) 取200微升标记溶液代替培养板中的培养基。

(4) 培养过夜至24小时。

(5) 除去标记液，使用2毫升PBS洗涤三次。离心弃上清。

(6) 使用荧光显微镜或者共聚焦显微镜检测荧光标记情况，然后进行下一步实验。

活体成像

(1) 麻醉动物。

(2) 尾静脉注射纳米晶体（主动靶向作用注射0.4nmol；被动靶向作用注射6nmol）。

(3) 成像系统镜成像分析。

三 参考文献

1. Jaiswal, J.K., Simon, S.M. 2007. Optical monitoring of single cells using quantum dots. Methods Mol Biol. 374:93-104.

2. Gao, X., Chung, L.W., Nie, S. 2007. Quantum dots for in vivo molecular and cellular imaging. Methods Mol Biol. 374:135-45.