FlowCytomix操作常见问题

Flow cytomix实验之前注意事项

1、混和：

在准备珠子混和物的时候，吸出的珠子直接加到管子的底部，以免珠子留在管壁有损失。

混和标准品或样品的时候马上涡旋珠子，在把试管放到流式细胞仪之前每个样品再次涡旋3-5秒，这样可以更好的在FL3/FL4通道区分珠子的种类。

2、避免双倍的珠子数目：

在把珠子的溶液加到测定板上的时候，把珠子加到孔中的标准品或样品的溶液中，确保不要粘附到孔的边上。

3、堵塞过滤板：

血清或血浆样品在洗涤过程中可能堵塞过滤板，如果发生这种情况，小心的推动通过板孔的针。

同一样品Flow cytomix与ELISA所得结果不同

荧光报告系统比ELISA具有更多的优势，比如动态范围更大。由于复杂性和珠为基础的动力学分析，用ELISA所得的定量结果可能与Flow cytomix 所得的不同。因此，只与所得值正相关，而不是比较ELISA和Flow cytomix的绝对值。

什么是血清血浆的能够检测到的可靠的最低值

血清或血浆中的细胞因子经常会低于常规免疫检测的水平，这是由于大多数细胞因子仅仅在自身周围具有较高的免疫活性，而且多数情况下，具有半衰期。因此，可以合理的假定，仅仅在出现病理变化的时候细胞因子才会在全身的血清和血浆中检测出较高的数量。对于趋化因子和生长因子可能产生较高的水平和较长的半衰期，因此更容易被检到。

标准品注意事项

1、标准品的准备：在开始之前离心标准品管；

2、标准品的建立：不要用稀释12个小时后的标准品，每个实验都要用新鲜的标准品稀释品；

3、严格按照说明书操作，微珠的量不精确会影响实验的敏感性；

4、FlowCytomix是用PE荧光标记的，在加入指示试剂之后所有步骤都要避光，以获得最大荧光信号。