分类栏目

技术服务中心

当前位置：首页 > 技术服务中心 > 知识库 > 关于血清的那些事儿（一）：血清中的沉淀

关于血清的那些事儿（一）：血清中的沉淀

发布时间：2020-04-30 09:34分享：

与细胞为伴的你，

是否为血清中的沉淀所困扰？

血清中的沉淀是什么？

哪些操作导致沉淀增多？

沉淀该如何去除？

血清究竟该如何存储，如何解冻？

你想要的都在这里！

血清

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体，是血浆去除纤维蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和多肽（如生长因子、胰岛素、促生长激素）等。血清是细胞培养过程中重要的营养物质，同时也对细胞起到一定的保护作用。

血清中的沉淀是什么

用于细胞培养的各种血清产品（胎牛血清、新生牛血清和马血清等）中都存在各种类型的沉淀。除了胆固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也会含有纤维蛋白和磷酸钙。虽然沉淀可引起初始问题，但在细胞培养应用方面，沉淀一般不会对血清的性能产生影响。

1. 纤维蛋白

肉眼可见的较大物质（可达 1-2 mm）。血清是在低温条件下收集并迅速加工处理，导致一些纤维蛋白原（纤维蛋白的前体）仍存在于溶液中。虽然过滤去除了绝大部分的纤维蛋白，但解冻过程中，纤维蛋白原会再次转化成纤维蛋白析出，形成沉淀。

2. 磷酸钙

一种常见的沉淀物，表现为云状。通过倒置显微镜观察，会发现许多小黑点。由于布朗运动，这些黑点可自由移动，因此常备误认为是微生物污染。

少量的沉淀是血清解冻过程中的正常现象，过于澄清的血清并不代表更高的品质，也可能是「预老化」（加工过程中反复冻融尽可能的去除纤维蛋白原）的结果。虽然血清中的沉淀很难预测和阻止，但合理正确的储存和使用方法可以降低血清中沉淀的析出，同时也可采取简单的方式去除沉淀物。

沉淀增多的原因

去除沉淀的方法

如果血清中含有大量的沉淀，我们不建议直接过滤血清。若去除这些絮状沉淀物，可将血清分装至无菌离心管中，以 400 g 稍微离心，上清液直接加入培养基内一起过滤。

血清的解冻方法

1. 将冻存的血清移到 2-8℃ 的冰箱中，过夜处理；

2. 将血清移至 37℃ 水浴中，间歇性摇晃混匀底部的溶解物，直至全部溶解。

注意：

① 温和的升温过程可有效减少沉淀的产生，不推荐直接高温解冻血清；

② 解冻之后的血清不要长时间放置在 37℃ 下；

③ 若血清没有混匀且放置于高于 40℃ 的水浴中，底部的蛋白会变性形成沉淀；

④ 在解冻过程中，需不断的摇晃混合以阻止形成梯度及沉淀；

⑤ 在解冻或长时间储存之后，血清中会出现浑浊物和絮状物；

⑥ 反复冻融会造成血清的沉淀增多，给后续处理带来麻烦，我们建议血清的解冻/冻存次数越少越好。

血清的储存方法及注意事项

血清应当储存在 -10℃ 或更低温度条件下。

储存在-80℃下的血清，虽然在性能方面也没有任何变化，但我们建议不要在该条件下储存，一方面 -80℃ 会增大血清包装瓶破裂的风险，另一方面解冻时巨大的温度变化会导致产生更多的沉淀。

血清一旦解冻，可在 2-8℃ 条件下储存 6 周。如果解冻之后的血清储存时间需要大于 6 周，建议分装成合适的体积并重新冻存。

关于 HyClone

	HyClone 品牌诞生于 1967 年，总部位于美国犹他州洛根市，为生产血清而创立；
	第一家在胎牛血清生产中引入完全真正混合技术的公司；
	最早将心脏穿刺取血，三次 100 nm 过滤等技术应用到血清的生产当中，建立了血清生产行业的金标准；
	2000 年 ATCC 对 HyClone 血清实行免检采购；